Purifikace oligonukleotidů pomocí semipreparativní kapalinové chromatografie s reverzní fází
Získejte přehledný návod pro purifikaci syntetických oligonukleotidů a analýzu výsledné purifikace pomocí semipreparativní kapalinové chromatografie na reverzní fázi (RP-LC).
Prohlédněte si bezproblémovou integraci systému Vanquish Analytical Purification LC do vývoje purifikace a analýzy oligonukleotidů.
Obr. 1: Purifikace oligonukleotidů pomocí semipreparativní
kapalinové chromatografie na reverzní fázi
Hlavní benefity aplikace
- Začlenění platformy Thermo Scientific™ Vanquish™ LC do výrobního workflow přední farmaceutické společnosti v oboru, Eurofins Genomics Europe Pharma and Diagnostic Products & Services Synthesis GmbH, Ebersberg, Německo, k purifikaci oligonukleotidů definovaných zákazníkem na reverzní fázi.
- Zdůraznění flexibility UHPLC a HPLC systémů Thermo Scientific™ Vanquish™, které mohou pracovat nejen za analytických podmínek UHPLC, ale pokrývají také aplikace semipreparativní LC purifikace pomocí integrovaného sběrače frakcí Thermo Scientific™ Vanquish™ Fraction Collector.
- Vysoce přesná izolace cílových syntetických produktů pomocí Thermo Scientific™ Vanquish™ Analytical Purification LC system.
Obr.2: Analytické purifikační LC systémy Thermo Scientific
Vanquish
V posledních několika letech vzrostl zájem o oligonukleotidy v oblasti biochemického výzkumu a diagnostiky a jako o léčiva, proto bylo vynaloženo velké úsilí na optimalizaci a automatizaci jejich syntézy. Syntéza oligonukleotidů zahrnuje velké množství jednotlivých reakcí, což nevyhnutelně vede k akumulaci nečistot, jako jsou zkrácené sekvence. Proto je purifikace požadovaných oligonukleotidů klíčovým krokem. Od 70. let 20. století se k analýze a čištění syntetických oligonukleotidů používá několik chromatografických přístupů. V posledních letech došlo k významnému vývoji z hlediska výkonu přístrojů a stacionární fáze. Pokud je požadována vysoká čistota produktů, padá volba na metodu HPLC. Mezi separační techniky běžně používané pro separaci nukleových kyselin patří RP-HPLC (reverzní fáze-HPLC).
Rostoucí význam oligonukleotidů jako terapeutických látek
zvyšuje úroveň kontroly kvality. V těchto protokolech je vyžadována
chromatografická analýza API (active pharmaceutical ingredients), aby byla
zajištěna detekce kontaminantů na úrovni koncentrace až do stopových množství
ve vztahu k léčivu. Tato práce demonstruje purifikaci oligonukleotudů pomocí semipreparativní
kapalinové chromatografie na reverzní fázi. Cílem je rozlišit vedlejší produkty
syntézy DNA, izolovat a zachytit cílové oligonukleotidy a určit účinnost
purifikace prostřednictvím zpětné analýzy shromážděných frakcí, a to vše na LC
systému Vanquish Analytical Purification, což usnadňuje integrovaný Vanquish
Fraction Collector.
Obr.3: Analytické
purifikační LC systémy Thermo Scientific Vanquish
Veškeré podrobnosti naleznete v přiložené aplikaci, nebo nás neváhejte kontaktovat na eliasova@pragolab.cz.
Tým Pragolab s.r.o.
Nenechte si ujít další zajímavosti
- Thermo Scientific Stellar - revoluční hmotnostní spektrometr
- Představujeme: Revoluční platforma iontových chromatografů Thermo Scientific™ Dionex™ Inuvion™ z pohledu aplikací!
- Thermo Scientific Dionex Inuvion – nová úchvatná platforma iontových chromatografů
- UVIDĚT ZNAMENÁ UVĚŘIT – NOVÁ PŘIDANÁ INFORMACE K VÝSLEDKŮM TERMICKÉ A MECHANICKÉ ANALÝZY
- Analýza neutrálních i iontových PFAS v ovzduší pomocí termické desorpce ve spojení s plynovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií (TD-GC-MS/MS).